Técnica por agrobacterium tumefaciens
As agrobactérias são microorganismos que vivem no solo, e tem capacidade de penetrarem em algumas espécies vegetais. Esta bactéria é responsável por causar a galha-da-coroa em algumas plantas.
A mesma possui um plasmídeo que transporta um tumor Ti, que induz as células das plantas hospedeiras a produzir hormônios vegetais que garante nutrição da bactéria.
A modificação genética é efetuada no plasmídeo Ti, onde ele começa a expressar genes não essenciais, que por sua vez o transforma em um vetor natural de transformação das plantas. Uma vez que o agrobacterium perde parte do seu T-DNA, ele se torna incapaz de produzir tumores nos hospedeiro.
Na transformação mediada por Agrobacterium é necessário que a bactéria fique em contato com explantes, com potencial regenerativo, como segmentos de folhas jovens, embriões zigótenos, entrenós, cotilédones etc. A técnica consiste em colocar o explante na presença do vetor de transformação (Agrobacterium) contendo o gene de interesse onde eles são co-cultivados. As bactérias então infectam o tecido vegetal iniciando o processo de transferência e transformação do genoma da planta. A seguir o tecido é cultivado em meio de regeneração contendo antibiótico para eliminação da Agrobacterium e um agente seletivo para identificar as células transformadas. Essas plantas transformadas são então, regeneradas in vitro e posteriormente aclimatadas (Brasileiro e Cançado, 2000). Por ser uma metodologia fácil de ser aplicada e de baixo custo à transformação via Agrobacterium tem sido a mais amplamente utilizada e como exemplo muito eficiente para dicotiledôneas.
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